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壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶(Soil-Fluorescein diacetate, S-FDA)試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意:正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預期差異大的樣本做預測定。測定意義
FDA 水解反應能很好的反應土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統中有機質(zhì)的轉化,是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標之一。

測定原理

FDA 是一種無(wú)色化合物,在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解,并經(jīng)脫水反應,產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素,穩定不易被分解,并在 490nm 處有強吸收峰,通過(guò)檢測 490nm 處的吸光值變化可計算得FDA 水解酶活性。

自備實(shí)驗用品及儀器

天平、低溫離心機、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

標準液:液體 4mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑 1 瓶,-20℃避光保存,臨用前加 4mL 試劑三溶解。試劑三:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。

樣本處理

稱(chēng)取風(fēng)干過(guò) 30-50 目篩土壤約 0.1g,備用。

測定操作表

  空白管 標準管 對照管 測定管
樣本(g)     0.05 0.05
標準液(μL)   40    
雙蒸水(μL) 40      
試劑一(μL) 200 200 240 200
試劑二(μL)       40
充分混勻,30℃,震蕩 1h
試劑三(μL) 160 160 160 160
10000g,25℃,離心 5min,取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測定 490nm 處吸
光值A,△A1=A 標準管-A 空白管,△A2=A 測定管-A 對照管
注意:空白管和標準管只需測定一次。酶活性計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。
S-FDA 活性(μmol/d/g 土樣)=(△A2÷△A1×C 標準品)×V 反總÷W
= 0.96×(△A2÷△A1)÷W
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。
S-FDA 活性(μmol/d/g 土樣)=(△A2÷△A1×C 標準品)×V 反總÷W
= 0.96×(△A2÷△A1)÷W
C 標準品:標準品濃度 100μmol/L;V 反總:反應總體積,0.4mL;W:樣本質(zhì)量,g

 
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