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食物總抗氧化能力(TAC)熒光法(ORAC)定量檢測試劑盒-技術(shù)資料/價(jià)格-赫澎上海生物

HEPENGBIO 食物總抗氧化能力(TAC)熒光法(ORAC)定量檢測試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

 
主要用途
 
HEPENGBIO 食物總抗氧化能力(TAC)熒光法(ORAC)定量檢測試劑是一種旨在通過(guò)使用熒光素探針, 受到有機氮自由基 AAPH 的破壞,但在抗氧化劑的存在下,得到抑制,由此通過(guò)熒光分光光度儀,觀(guān)察其峰值下降程度的變化,來(lái)定量檢測對應于標準水溶性生育酚Trolox 的總抗氧化能力,即消除自由基等值濃度的方法。適用于各種新鮮食物樣品總抗氧化能力檢測。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)易,性能穩定。
 

技術(shù)背景

 
超氧自由基陰離子(superoxide radical;O2-)、過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基
(hydroxyl radical;OH-)、過(guò)氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氫過(guò)氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、過(guò)氧亞硝基陰離子(peroxynitrite anion;ONOO-)次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、單線(xiàn)態(tài)氧氣(singlet oxygen)等細胞內活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導致細胞衰老或凋亡,甚而導致諸如冠心病、風(fēng)濕性關(guān)節炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。在生物系統內,通過(guò)抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等,大分子,例如白蛋白、銅藍蛋白(ceruloplasmin;CER)、鐵蛋白(ferritin)和抗氧化因子,例如生育醇、類(lèi)胡蘿卜素、抗壞血酸、還原性谷胱甘肽和尿酸膽紅素
(bilirubin)等,產(chǎn)生抗氧化能力,即捕獲自由基的能力,達到消除或降低ROS的損害。通過(guò)氧自由基吸光能力(oxygen radical absorbance capacity;ORAC),即使用熒光素(fluorescein)作為探針,2,2'-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽(2,2-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride;AAPH)作為過(guò)氧自由基供體(peroxyl radical donor),其攻擊探針,產(chǎn)生熒光淬滅,一旦受到抗氧化劑作用,而防止熒光消失,由此評價(jià)抗氧化潛力和活性,也就是自由基去除作用(free radical scavenging),在熒光分光光度儀(激發(fā)波長(cháng)485nm±20,散發(fā)波長(cháng)528nm±20)的幫助下,觀(guān)察其峰值下降程度的變化,并與標準化抗氧化劑水溶性生育酚Trolox對照。
 

產(chǎn)品內容

 
HEPENGBIO 清理液(Reagent A) 500 毫升
HEPENGBIO 緩沖液(Reagent B) 4 毫升
HEPENGBIO 染色液(Reagent C) 7.5 毫升
HEPENGBIO 氧化液(Reagent D) 1 管
HEPENGBIO 標準液(Reagent E) 200微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)   1 份
 

保存方式

 
保存 HEPENGBIO 清理液(Reagent A)和 HEPENGBIO 緩沖液(Reagent B)在 4℃冰箱里,其余的保存在
-20℃冰箱里,避免光照;有效保證 6 月
 

用戶(hù)自備

 
50 毫升燒杯:用于樣品操作的容器
15 毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
1.5 毫升離心管:用于標準樣品配制的容器
4℃臺式離心機:用于樣品操作
200 微升 1 厘米光徑比色皿或黑色 96 孔板:用于熒光分析的容器熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于熒光分析
 

實(shí)驗步驟

 

一、 樣品準備

 
 
1、固態(tài)食品處理
1. 秤取 1 克固態(tài)食品或粉末到 50 毫升燒杯,杯口封口膜密封
2. 加入 8 毫升 HEPENGBIO 清理液(Reagent A
3. 攪拌 30 分鐘,充分混勻
4. 繼續加入 HEPENGBIO 清理液(Reagent A到終容量為 10 毫升
5. 過(guò)濾紙過(guò)濾,去除不溶性固體顆粒
6. 封口膜封口備用
 

2、液態(tài)食品處理

1. 移取 5 毫升待測液態(tài)食品到 15 毫升錐形離心管
2. 放進(jìn)臺式離心機離心 10 分鐘,速度為 1500g
3. 移取上清液到新的 15 毫升錐形離心管
4. (選擇步驟)可以加入適量的 HEPENGBIO 清理液(Reagent A
5. (選擇步驟)過(guò)濾紙過(guò)濾(如果離心處理,樣品仍然不清澈)
6. 置于冰槽里備用或放進(jìn)-20 冰箱里保存二、標準液準備
1. 準備好 5 個(gè) 1.5 毫升離心管,標記為 1 至 5 號管
2. 分別加入 50 微升 HEPENGBIO 緩沖液(Reagent B到 2 至 5 號管
3. 移取 100 微升 HEPENGBIO 標準液(Reagent E到 1 號管,混勻
4. 小心移取 50 微升 1 號管的 HEPENGBIO 標準液(Reagent E到 2 號管,混勻
5. 小心移取 50 微升 2 號管稀釋的 HEPENGBIO 標準液(Reagent E到 3 號管,混勻
6. 小心移取 50微升 3 號管稀釋的 HEPENGBIO 標準液(Reagent E到 4 號管,混勻
7. 將 1 至 5 號管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標準管濃度見(jiàn)下表
 
管號 HEPENGBIO 緩沖液Reagent B HEPENGBIO 標準液(Reagent
E
測定體系
標準 Trolox 濃度
 
1 0 100 微升 1微摩爾/升
2 50 微升 50 微升 0.5 微摩爾/升
3 50 微升 50 微升 0.25 微摩爾/升
4 50微升 50 微升 0.125 微摩爾/升
5 50微升 0 0
 

三、 樣品測讀

 
 
實(shí)驗開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化,移取 1.5 毫升 HEPENGBIO 緩沖液(Reagent B到 1 管 HEPENGBIO 氧化液Reagent D里,混勻,置于暗室里,標記為 HEPENGBIO 氧化工作液,避免光照。然后進(jìn)行下列操作。
 
1. 準備 1 個(gè)黑色 96 孔板,做好標記:最大對照孔、標準樣品孔、待測樣品孔
2. 分別移取 150 微升 HEPENGBIO 染色液(Reagent C到黑色 96 孔板里的每個(gè)孔里
3. 加入 25 微升 HEPENGBIO 緩沖液(Reagent B到最大對照孔
4. 加入 25 微升上述配制的 HEPENGBIO 標準液(Reagent E到相應標準樣品孔里
5. 加入 25 微升樣品(100 微克食品總量)到待測樣品孔里
6. 放進(jìn) 37℃培養箱里孵育 30 分鐘
7. 分別加入 25 微升 HEPENGBIO 氧化工作液到標準樣品孔和待測樣品孔里
8. 加入 25 微升 HEPENGBIO 緩沖液(Reagent B到最大對照孔
9. 輕輕搖動(dòng)黑色 96 孔板,使其混勻
10. 放進(jìn) 37℃培養箱里孵育 15 分鐘
11. 即刻放進(jìn)熒光分光光度儀或熒光酶標儀里測讀:激發(fā)波長(cháng) 485nm±20,散發(fā)波長(cháng) 528nm±20,增益倍數25至100
12. 分析結果:
1. 構建標準曲線(xiàn):縱坐標(Y軸)為熒光單位;橫坐標(X軸)為標準Trolox濃度(微摩爾/升)
2. 最大對照孔為最大熒光單位讀數
3. 標準樣品孔和待測樣本孔為實(shí)際熒光單位讀數
4. 根據標準曲線(xiàn)獲得樣品對應Trolox濃度(微摩爾/升)
5. 計算樣品實(shí)際總抗氧化能力
【根據標準曲線(xiàn)獲得樣品對應Trolox濃度(微摩爾/升)X0.2(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數】÷0.025(樣品容量;毫升)=(微摩爾/升Trolox等值)
6. 根據下列公式計算測定體系中樣品量的總抗氧化能力(實(shí)際抑制百分率)
              【實(shí)際熒光單位讀數÷最大對照孔熒光單位讀數】X100%
7. IC50:50%抑制率所需的樣品單位:Trolox 等值(微摩爾/升)或樣品重量(毫克/毫升)或樣品容量(微升)
          X(所需樣品單位)=(已知樣品單位÷實(shí)際抑制百分率)X50%
 

注意事項

 
1. 本產(chǎn)品為 50 次操作,包括標準品
2. 本產(chǎn)品測試范圍為 100 納摩爾至 1 微摩爾 Trolox 等值
3. 操作時(shí),須戴手套
4. 樣品制備的所有操作均須在 4℃狀態(tài)下進(jìn)行
5. 建議復孔操作
6. 用戶(hù)可以調整標準曲線(xiàn)區間,尤其出現標準5號管讀數大于4號管讀數時(shí)
7. 測試前,樣品須新鮮收集
8. 樣品須清澈
9. 樣品讀數越高,下降程度越小,抗氧化能力越高
10. 可以使用比色皿檢測
11. 如果樣品抗氧化劑濃度過(guò)高或過(guò)低, 建議稀釋或增加樣品容量或濃度
12. 如果測試樣品很多,建議使用排槍移液
13. 本公司提供系列抗氧化分析試劑產(chǎn)品
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